雞標(biāo)志物CA724(CA724)ELISA試劑盒

ELISA試劑盒用法

酶免ELISA試劑盒是一種常用的學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，常用于抗原或的定量檢測(cè)。這種試劑盒利用酶聯(lián)吸附法（ELISA）技術(shù)，將已知的抗原或吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。ELISA試劑盒具有高靈敏度、高特、快速、易操作等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和化學(xué)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

標(biāo)記

良好的酶結(jié)合物取決于兩個(gè)條件：即價(jià)的和高活性的酶。的活性和純度對(duì)制備標(biāo)記至關(guān)重要，因?yàn)樘胤磻?yīng)隨活性和純度的而增強(qiáng)。在酶標(biāo)記中，的活性有所，故需要純度高、效及抗原親和力強(qiáng)的球蛋白使用親和層析提純的，可性，而且可稀釋使用，非特吸附。

酶與交聯(lián)，常用法和過(guò)碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標(biāo)記的改良過(guò)碘酸鈉法簡(jiǎn)單易行，標(biāo)記效果好，特別適用于實(shí)驗(yàn)室的小批量制備。其標(biāo)記程序?yàn)椋簩?μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中，加入新鮮配制的0.06 mol/L的過(guò)碘酸鈉（NaIO4）水溶液0.5ml，混勻置4℃冰箱30分鐘 ， 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml，室溫放置30分鐘后加入含5g純化的水溶液1ml，混勻并裝透析袋，以0.05mol/L、pH9.5的碳酸鹽緩沖液于4℃冰箱中慢慢攪拌透析6小時(shí)（或過(guò)夜）使之結(jié)合，然后吸出，加（NaBH4）溶液（5(g/ml)0.2ml，置4℃冰箱2小時(shí)，將上述結(jié)合物混合液加入等體積飽和銨溶液，置4℃冰箱30分鐘后離心，將所得沉淀物溶于少許0.02mol/L、pH7.4PBS中，并對(duì)之透析過(guò)夜（4℃），次日離心除去不溶物，即酶標(biāo)，用0.02mol/L、pH7.4PBS稀至5ml，進(jìn)行測(cè)定后，冷凍干燥或低溫保存。

雞標(biāo)志物CA724(CA724)ELISA試劑盒

酶聯(lián)吸附法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一種靈敏、特異的學(xué)技術(shù)，用于檢測(cè)抗原或的存在。其基本原理是將抗原或與酶結(jié)合，形成酶標(biāo)抗原或，保留其活性，同時(shí)又保留酶的活性。然后將酶標(biāo)抗原或與固相載體表面結(jié)合，形成酶-抗原-復(fù)合物通過(guò)底物顯色反應(yīng)，根據(jù)顏色變化來(lái)檢測(cè)抗原或的存在。ELISA具有高靈敏度、高特、快速、易操作等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)、生物領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

酶免ELISA試劑盒是一種常用的學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，常用于抗原或的定量檢測(cè)。這種試劑盒利用酶聯(lián)吸附法（ELISA）技術(shù)，將已知的抗原或吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原反應(yīng)在固相表面進(jìn)行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。ELISA試劑盒具有高靈敏度、高特、快速、易操作等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和化學(xué)等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。效果測(cè)定

測(cè)定內(nèi)容包括酶和活性、結(jié)合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結(jié)合率。

⑴ 酶與的活性　常用瓊脂擴(kuò)散或電泳法，使抗原與形成沉淀線，經(jīng)PBS漂洗1天，再以蒸餾水浸泡1小時(shí)，將瓊脂凝膠片浸于酶底物溶液中著色，如果出現(xiàn)應(yīng)有的顏色反應(yīng)，再用鹽水浸泡，顏色仍然不褪，表示結(jié)合物既有酶的活性，也有活性。良好的結(jié)合物在顯色后，瓊擴(kuò)滴度應(yīng)在1:16以上。另一個(gè)測(cè)定是用系列稀釋的酶標(biāo)直接以ELISA進(jìn)行方陣滴定，此法不僅可以測(cè)定標(biāo)記效果，還可以確定酶標(biāo)的使用濃度。

⑵ 結(jié)合物的定量測(cè)定　一般是對(duì)結(jié)合物中的酶和IgG進(jìn)行定量測(cè)定。常用紫外分光光度計(jì)于403nm和280nm進(jìn)行測(cè)定，然后按下列公式計(jì)算：

酶量（mg/ml）=OD403×0.42

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.4）×0.94×0.62

對(duì)于過(guò)碘酸鈉氧化法制備的標(biāo)記量，按下列公式計(jì)算：

IgG量（mg/ml）=（OD280－OD403×0.34）×0.62

已知酶量和IgG量后，即可計(jì)算出標(biāo)記的摩爾（mol）比值。

HRP/IgG摩爾比值=HRP（mg/ml）/IgG（mg/ml）×4

結(jié)合物中酶總量=HRP（mg/ml）×結(jié)合物溶液量

結(jié)合物產(chǎn)率=結(jié)合物中酶總量/標(biāo)記時(shí)加入的酶量×

用于ELISA的結(jié)合物的酶量為400(g/ml時(shí)效果一般，為500(g/ml時(shí)效果，達(dá) 1000(g/ml時(shí)效。mol.比值由于結(jié)合物中含的IgG并不完全可靠，所以不能作為主要參數(shù)。一般認(rèn)為mol.比值為0.7時(shí)效果一般，1.0時(shí)效果，1.5-2.0。酶結(jié)合率為 7%時(shí)效果一般，為9%－10%，達(dá)30%以上。

 

酶聯(lián)吸附法（ELISA）是一種靈敏、特異的學(xué)技術(shù)，常用于醫(yī)學(xué)、生物領(lǐng)域中的抗原或檢測(cè)。其使用范圍包括：1.臨床診斷：ELISA可以用于檢測(cè)傳染?。ㄈ?、等）、標(biāo)志物等，協(xié)助進(jìn)行診斷。2.食品安全：ELISA可以用于檢測(cè)食品中的有害（如殘留、獸藥殘留等），保障食品安全。3.監(jiān)測(cè)：ELISA可以用于評(píng)估水質(zhì)、空氣等指標(biāo)，監(jiān)測(cè)狀況。4.生物分子檢測(cè)：ELISA可以用于檢測(cè)生物分子，如蛋白質(zhì)、多肽、等，在生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域廣泛應(yīng)用?？傊?，酶聯(lián)吸附法在醫(yī)學(xué)、生物領(lǐng)域中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，是臨床診斷和中重要的輔助手段。

 

ELISA試劑盒適用行業(yè)ELISA試劑盒廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究、臨床醫(yī)學(xué)和工業(yè)等領(lǐng)域。1.在生命科學(xué)研究領(lǐng)域，ELISA試劑盒可以用于檢測(cè)細(xì)胞因子、、酶、等分子的含量和活性，用于學(xué)、學(xué)、分子生物學(xué)等研究領(lǐng)域。2.在臨床醫(yī)學(xué)診斷中，ELISA試劑盒可以用于檢測(cè)中的標(biāo)志物、、心肌酶等指標(biāo)，用于臨床診斷及監(jiān)測(cè)。3.在食品安全檢測(cè)中，ELISA試劑盒可以用于檢測(cè)食品中的殘留、殘留等有害，用于食品檢測(cè)和安全評(píng)估。4.在監(jiān)測(cè)中，ELISA試劑盒可以用于檢測(cè)中的化學(xué)、微生物等污染物，用于監(jiān)測(cè)和污染治理。5.在動(dòng)物防控中，ELISA試劑盒可以用于檢測(cè)動(dòng)物中的、抗原等指標(biāo)，用于動(dòng)物疫病防控和獸藥殘留檢測(cè)?？傊?，ELISA試劑盒在許多行業(yè)中都有廣泛的應(yīng)用。